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明膠酶譜實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介：

明膠酶譜實(shí)驗(yàn)是一種用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）活性的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，特別是MMP-2和MMP-9這兩種在細(xì)胞遷移、侵襲和組織修復(fù)中起關(guān)鍵作用的酶。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)MMP2和MMP9的活性，是分子生物學(xué)的常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。該實(shí)驗(yàn)通過SDS-聚丙烯酰胺（含0.1%明膠）電泳分離樣品，然后在二價(jià)金屬離子存在的緩沖系統(tǒng)中恢復(fù)MMP-2和MMP-9的活性，使凝膠中的明膠在相應(yīng)的遷移位置處水解，最后用考馬斯亮藍(lán)染色并脫色，從而在藍(lán)色背景上顯示出白色條帶，條帶的強(qiáng)度與MMP-2和MMP-9活性成正比。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備：取對(duì)數(shù)期癌細(xì)胞，并在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)，收集上清液并保存在-70°C下備用。

2. 蛋白質(zhì)濃度調(diào)整：根據(jù)細(xì)胞數(shù)調(diào)整蛋白質(zhì)濃度，并與上樣緩沖液混合。

3. 電泳：在4℃下進(jìn)行SDS-PAGE電泳約1.5小時(shí)。

4. 洗脫：電泳結(jié)束后，將凝膠放入洗脫液中振蕩洗脫，然后用漂洗液漂洗。

5. 孵育：將凝膠置于孵育液中37℃孵育42小時(shí)。

6. 染色與脫色：孵育后，用染色液染色3小時(shí)，然后用脫色液進(jìn)行脫色，直至條帶清晰可見。

7. 圖像分析：使用凝膠圖像分析系統(tǒng)分析并讀取譜帶面積、寬度和灰度值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

注意事項(xiàng)：

1. 避免氣泡：在制備聚丙烯酰胺時(shí)應(yīng)注意避免氣泡。

2. 緩沖液配制：明膠酶譜的活性受鈣離子、鋅離子和pH值等因素影響，因此緩沖液的制備應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確，應(yīng)使用超純水，并控制孵育溫度。

3. pH值控制：孵育溶液的pH值應(yīng)在7.5至7.6之間，以保持酶的最佳活性。

4. 避免變性：在樣本處理過程中避免樣品中的酶發(fā)生變性和失活，不宜對(duì)蛋白樣品進(jìn)行沸騰處理，且上樣緩沖液中應(yīng)避免含有β-巰基乙醇或DTT。

5. 明膠保存：明膠應(yīng)儲(chǔ)存在4°C下，制備后1周內(nèi)使用