實(shí)驗(yàn)概念：
考馬斯亮藍(lán)染色是一種基于蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)染料之間結(jié)合反應(yīng)的蛋白質(zhì)檢測(cè)、純化和定量分析技術(shù)?？捡R斯亮藍(lán)G-250在游離狀態(tài)下呈紅色，與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，常用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色，或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)流程：
- 電泳：首先，將蛋白質(zhì)樣本通過SDS-PAGE電泳進(jìn)行分離。
- 染色：電泳結(jié)束后，將凝膠放入考馬斯亮藍(lán)染色液中，室溫染色1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，直至凝膠顏色與染色液顏色接近。
- 脫色：倒出染色液，加入由甲醇、醋酸和去離子水組成的去染液，震蕩脫色2-3小時(shí)或直至背景清晰。
- 觀察與記錄：脫色后，在顯微鏡下觀察蛋白質(zhì)條帶，并使用相機(jī)或掃描儀記錄結(jié)果。
注意事項(xiàng)：
- 操作安全：考馬斯亮藍(lán)染色液呈酸性，有輕微腐蝕性，操作過程中需佩戴手套，避免染料接觸皮膚。
- 染料毒性：考馬斯亮藍(lán)染料有毒性，不建議加熱使用。操作后需妥善處理廢棄物。
- 樣品清洗：染色前用純水清洗凝膠能大大減少SDS等干擾雜質(zhì)。
- 染色后處理：染色后請(qǐng)盡快拍照，純水長(zhǎng)時(shí)間浸泡會(huì)導(dǎo)致蛋白和染料的流失。
- 試劑品質(zhì)：對(duì)染料的品質(zhì)無嚴(yán)格要求，但考馬斯亮藍(lán)G-250中可溶性染料的含量因來源和供應(yīng)商不同變動(dòng)很大，通常認(rèn)為Serva藍(lán)G含量最高。
- 器皿要求：使用潔凈無洗滌劑的塑料器皿或玻璃器皿，請(qǐng)勿使用石英、硅膠比色杯，因?yàn)槿玖蠒?huì)結(jié)合在此類材料上。
我們提供的結(jié)果形式：
- 圖像數(shù)據(jù)：提供染色和脫色后的凝膠圖像，展示蛋白質(zhì)條帶的分布情況。
- 定量分析：通過測(cè)量595nm處的吸光度，提供蛋白質(zhì)含量的定量分析結(jié)果。
- 實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包含實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、操作步驟、結(jié)果分析等詳細(xì)描述，以及實(shí)驗(yàn)中使用的試劑、儀器等信息。
- 技術(shù)支持：提供售后技術(shù)支持，確保客戶在下游實(shí)驗(yàn)及投稿過程中的問題得到及時(shí)解決。
