健康的動脈具有彈性，但隨著時間的推移，動脈壁會變硬，這種情況通常稱為動脈硬化。受累動脈的病變內(nèi)膜局部會有脂質(zhì)積聚、纖維組織增生和鈣質(zhì)沉著，形成斑塊。由于在動脈內(nèi)膜積聚的脂質(zhì)外觀呈黃色粥樣，因此稱為動脈粥樣硬化。

動脈粥樣硬化動物模型構(gòu)建的方法

一般來說，動脈硬化容易實現(xiàn)，而是否有斑塊、斑塊是什么樣子，斑塊的成分如何，斑塊發(fā)生的部位在哪里，這些往往與人類的動脈粥樣硬化斑塊有很大的差別，因此，應(yīng)當特別注意動物的選擇。

目前可以作為動脈粥樣硬化（AS）模型的動物有：兔、豬、鼠、雞、鴿、猴和犬等。其中兔和鼠是其中最常用的，兩者各有優(yōu)缺點：

兔對高脂飲食特別敏感易造模，是最早用于研究動脈粥樣硬化的實驗動物。然而其AS病變與人的病變只在表面上相似，病變中的脂類和巨噬細胞含量遠比人類大；

鼠具有抗AS性，但作為實驗動物，具有經(jīng)濟效益高、生存能力強、死亡率低的特點，鼠AS模型病變的形態(tài)、斑塊的破裂位置與人類十分相似，但鼠模型的斑塊破裂處缺乏纖維蛋白和血栓形成。

1）高脂、高膽固醇飼料誘導(dǎo)法

高脂飼喂法早在20世紀70年代已被采用，至今仍是模擬AS模型最重要的方法。特點是死亡率低，可長期觀察，但費時久。

造模機制：動物機體脂質(zhì)代謝紊亂，血脂升高，容易引起血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂、通透性增高，最終導(dǎo)致血管壁的脂質(zhì)浸潤、形成動脈粥樣硬化。

造模方法：在動物飼料中加入過量的膽固醇和脂肪。（在基礎(chǔ)飼料前提下，添加膽固醇、蛋黃、豬油。根據(jù)不同實驗?zāi)康?，采用不同配方。?/p>

由于嚙齒類動物(如小鼠、大鼠）對膽固醇幾乎不反應(yīng)，為了促進病變的形成，在高脂、高膽固醇飼料中可加入膽酸鹽、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、苯丙胺、維生素D、煙堿或蔗糖等，可進一步加速動脈病變的形成。

舉例：

①兔：選用4月齡左右雄性日本大耳白家兔或新西蘭家兔，給予含0.3%膽固醇飲食（建議飲食中膽固醇水平小于0.6%)，可使家兔血漿膽固醇迅速升高，6周后家兔主動脈弓可出現(xiàn)明顯動脈粥樣硬化斑塊。隨著飼喂時間延長，可誘導(dǎo)家兔胸主動脈、腹主動脈、冠狀動脈出現(xiàn)粥樣硬化斑塊。

②大鼠：含膽酸和硫脲嘧啶的高脂、高膽固醇飲食誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生高脂血癥及動脈粥樣硬化。此外，給大鼠飼喂高膽固醇飲食，同時給予大量維生素D2能使血漿膽固醇水平升高，主動脈和冠狀動脈出現(xiàn)粥樣斑塊。

③小鼠：選用6~8周C57BL/6小鼠，用含膽固醇1.25%、膽酸0.5%和脂肪15%的飲食飼喂10周，能誘導(dǎo)出動脈粥樣硬化早期病變。

優(yōu)點：操作簡單，成本較低，較符合人類飲食的特點，病理改變與人早期相似。缺點：造模時間較長，不易形成類似人體的后期粥樣斑塊病變，期間易導(dǎo)致繼發(fā)感染從而影響實驗的穩(wěn)定性。

適用于：早期動脈粥樣硬化的研究。

2） 免疫損傷法

AS的發(fā)病機制有免疫因素的存在，所以可以從免疫學(xué)的角度來建立AS模型，如使用牛血清白蛋白、卵清白蛋白、肺炎衣原體、EB病毒、巨細胞病毒、幽門螺桿菌、內(nèi)毒素等進行免疫刺激，從而誘發(fā)AS的產(chǎn)生。

造模機制：免疫刺激引起動脈粥樣硬化斑塊形成及sCD40L水平升高，從而引起動脈粥樣硬化。

造模方法：（1）將大鼠主動脈勻漿給兔注射，可引起血膽固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。

（2）給兔注射馬血清10ml/kg/次，共4次，每次間隔17天，動脈內(nèi)膜損傷率為88%，冠狀動脈亦有粥樣硬化的病變；同時給予高膽固醇飼料，病變更加明顯。

（3）兔喂飼含1%膽固醇的飲料，靜脈注射牛血清白蛋白250mg/kg，可加速高膽固醇飼料引起的動脈內(nèi)膜病變形成。

優(yōu)點：建模時間短、成活率高、模型穩(wěn)定、可控性好。
缺點：所形成的單純免疫性炎性不能涵蓋動脈粥樣硬化炎性反應(yīng)過程，其病理特征也有待進一步觀察。

適用于：動脈粥樣硬化發(fā)病機制的研究

3）血管內(nèi)皮損傷法

造模機制：通過外力損傷血管內(nèi)皮細胞，使血管內(nèi)皮通透性、黏附性、血液凝固改變，造成動脈內(nèi)膜損傷或功能障礙，再輔助性飼喂高脂、高膽固醇飲食，可誘導(dǎo)動脈粥樣硬化形成。

根據(jù)不同的外力，血管內(nèi)皮損傷法可以分為機械損傷法和物理生化因子損傷法。前者主要是用球囊導(dǎo)管、鋼絲套圈或金屬絲等來損傷血管內(nèi)皮，而后者則是用化學(xué)藥品、電刺激、空氣干燥或放射線等來損傷血管內(nèi)皮。

其中球囊損傷法具有可靠性強、可重復(fù)性高、更符合臨床動脈粥樣硬化疾病的發(fā)生發(fā)展過程等優(yōu)點。

A 球囊損傷法

方法：將球囊導(dǎo)管插入血管后，將球囊充氣，反復(fù)進出牽拉3次，以損傷血管內(nèi)膜。

大鼠：將充滿生理鹽水的塑料球囊導(dǎo)管自頸外動脈進入胸主動脈，向外拉至頸外動脈再進入胸主動脈，反復(fù)3次，再喂以高脂、高膽固醇飲食8周后，可以出現(xiàn)明顯動脈粥樣硬化病變。

注意：球囊損傷管到達頸總動脈中段后，進行反復(fù)牽拉時，用力一定要輕，以防動物意外死亡。

優(yōu)點：時間短，定位明確，易于評價，并可根據(jù)不同的研究目的和動物，選用不同的動脈造模。
缺點：形成的斑塊較易脫落而形成血栓，若球囊大小控制不佳會導(dǎo)致動脈破裂或建模失敗。

適用于：動脈粥樣硬化的用藥或轉(zhuǎn)基因治療實驗的研究
B 氣體干燥法

方法：空氣干燥法是以流量為50-250ml/min的干燥清潔氣流吹實驗部位的動脈血管內(nèi)膜5-15min，以造成內(nèi)膜內(nèi)皮細胞變性和功能減退，建立動脈粥樣硬化模型。

優(yōu)點：成模時間短，操作柔和，內(nèi)膜變化更接近自然狀態(tài)下動脈粥樣硬化形成的進程，可控性強，不易損害到血管的其他部位。

缺點：氣流吹的部位要相對恒定，不宜過長，時間也要充足，若內(nèi)皮損傷輕則不能形成動脈粥樣硬化。

適用于：動脈粥樣硬化內(nèi)皮細胞作用的研究

4）動脈結(jié)扎法

方法：對血管結(jié)扎縫合使血管內(nèi)血流速度和切應(yīng)力發(fā)生改變，建立動脈粥樣硬化模型。

優(yōu)點：對內(nèi)膜損害小且能保留血管彈性變形的能力。

缺點：需精良的設(shè)備，手術(shù)操作技術(shù)難度大、要求高

5）基因改造法

由于鼠具有抗AS性，各種基因敲除和轉(zhuǎn)基因小鼠是近年來的研究熱點之一。脂蛋白 E（ApoE）或低密度脂蛋白受體（LDL-R）基因敲除鼠可自發(fā)形成動脈粥樣硬化斑塊，是動脈粥樣硬化研究的常用模型。

優(yōu)點：能自發(fā)產(chǎn)生動脈粥樣硬化。

缺點：基因改造小鼠體積小，臨床性檢查評估很難，與人類脂類代謝差異較大，存在一定的局限性。

適用于：動脈粥樣硬化炎癥和免疫因子的作用機制研究

6）聯(lián)合法

高脂喂養(yǎng)造成的動物高脂血癥是引起動脈粥樣硬化的基礎(chǔ)。而各種方法導(dǎo)致內(nèi)膜損傷，加快了動脈粥樣硬化的形成，從而節(jié)省造模所需要點時間。

如：靜脈注射脂多糖聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)法：通過兔耳緣靜脈注射不同劑量(100、200、1000、2000 ng/ kg)的高純級脂多糖引起發(fā)熱性炎癥反應(yīng),同時聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)建立兔 AS 模型。

腹腔注射維生素D3聯(lián)合高脂飼料聯(lián)合喂養(yǎng)法：對Wistar大鼠飼以高脂飼料基礎(chǔ)上給予腹腔注射維生素D3，4周后，其血清Ca2+、三酰甘油及低密度脂蛋白C明顯升高，動脈內(nèi)膜下可見明顯的鈣化，出現(xiàn)典型動脈粥樣硬化病理變化。

模型的評價指標

(1) 血清生化指標檢測：如總膽固醇（TC）含量、甘油三酯（TG）含量、高密度脂蛋白（HDL）含量、低密度脂蛋白（LDL）含量、丙二醛（MDA）含量和氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)含量等。

(2) 病理形態(tài)學(xué)指標

病理學(xué)檢測是“金指標”，是評價As病變重要的特異性指標

①肉眼大體觀察動脈管壁進行病變硬化分級：

0級：內(nèi)膜比較光滑，無奶油樣變化；

0.5級：內(nèi)膜有廣泛奶油樣變化，但無凸出于表面的斑塊；

1級：有明顯的凸起奶油樣斑塊，面積小于3mm2；

2級：斑塊面積大于3mm2；

3級：斑塊融合成片，大部分斑塊面積大于3mm2；

4級：斑塊幾乎覆蓋整個動脈內(nèi)膜。

②主動脈弓油紅O染色

③主動脈HE染色

④電鏡觀察