實(shí)驗(yàn)技巧
透射電鏡樣本準(zhǔn)備方法及要求
以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!
1、動(dòng)物組織樣本
①1-3min內(nèi)取樣,取樣組織米粒大小,盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時(shí)左右待組織變硬以后再修整組織進(jìn)行后固定。
②取材時(shí)盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進(jìn)行固定)。
③取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。
④組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
2、植物組織樣本
①取材要求同動(dòng)物組織樣本。
②組織投入固定液后需要進(jìn)行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進(jìn)固定液內(nèi),組織不能漂浮在固定液表面。
3、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞:培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基不經(jīng)漂洗迅速加電鏡固定液用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞收集到離心管內(nèi)(不要用胰酶消化細(xì)胞),離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄固定液后加新的電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
4、細(xì)菌樣本
長于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌:連帶著培養(yǎng)基一起挑下細(xì)菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存, 4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
懸浮細(xì)菌孢子等:離心收集細(xì)菌要肉眼可見細(xì)菌沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
5、病毒
破碎組織細(xì)胞,粗離心去除細(xì)胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,4°保存運(yùn)輸,盡快滴片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。
6、外秘體囊泡等
客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)懸浮,4°保存運(yùn)輸,盡快制片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,最好數(shù)小時(shí)內(nèi)完成滴片負(fù)染,否則做出的效果很不理想甚至完全觀察不到)
7、納米材料等無機(jī)材料
直接準(zhǔn)備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮,常溫保存運(yùn)輸即可。做負(fù)染后電鏡觀察拍照。