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呼吸系統(tǒng)類動物模型

慢性支氣管炎模型

動物的選擇

考慮到實驗動物的繁殖周期、實驗成本、動物基因組研究進程等多種因素,大鼠、小鼠、豚鼠等廣泛應用于CB模型。

造模方法

一、煙熏法

煙熏法多以單一煙絲或混合煙霧材料(如煙葉、鋸末、刨花各50g)為刺激物置于特制煙室制備CB模型。

造模方法:選用大鼠或小鼠作為實驗動物,30~50min/次,2~4次/d,持續(xù)28~60d。

結果顯示模型組小鼠氣道上皮出現(xiàn)大量炎細胞浸潤,腺體分泌功能亢進,有黏液栓形成,肺泡灌洗液中白細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)量明顯增加,蛋白含量上調,血漿和肺組織勻漿的超氧化物歧化酶活性和總抗氧化能力降低,丙二醛( MDA) 含量增加。

優(yōu)點:煙熏法致CB模型的建立呈漸進性發(fā)展,簡便可靠,炎癥病變確切,有助于研究CB發(fā)生發(fā)展過程中各階段的病理變化以及相應炎細胞浸潤及炎性標志物的變化,為臨床早期診斷和治療提供理論依據(jù)。

缺點:致煙劑原料種類單一,其燃燒產(chǎn)生的煙霧濃度難以控制,且實驗周期較長,穩(wěn)定性較差。

二、化學藥物法

多種化學藥物能夠引發(fā)CB,常見的藥物有二氧化硫、氯氣、氨水和脂多糖(LPS)。


1、二氧化硫吸入法

造模方法:選用大鼠及小鼠作為實驗對象,將不同濃度的二氧化硫置于玻璃鐘罩或者特制熏箱,將實驗動物分批放入進行10s~30min熏制,1次/d,全程 15~28d。

優(yōu)缺點:本方法能夠引起CB的病理變化,病情發(fā)展嚴重后甚至導致氣流阻塞并發(fā)肺氣腫。本方法快速簡易,但對氣管及支氣管的刺激性較大,過量的二氧化硫會引起呼吸道黏膜燒灼傷,上皮細胞增生壞死,容易導致動物模型發(fā)生急性損傷甚至死亡,故選用合適的濃度以及建立過程,使氣道損傷程度適中尤為重要。


2、氨水霧化法

造模方法:選取小鼠作為實驗對象,2min/次,每次間隔0.5h,5次/d,連續(xù)10d,10d后采用氨水霧化2min/次,每次間隔0.5h,2次/d,連續(xù)20d,全程總共30d。

模型組咳嗽次數(shù)明顯增加、支氣管黏膜上皮細胞空泡變性增生、細支氣管皺縮、炎性細胞浸潤、纖毛發(fā)生倒伏脫失、部分肺泡隔斷裂成肺大泡、管腔大量漿液滲出及肺間質血管擴張淤血。

優(yōu)缺點:本方法簡便易行,但在實施過程中污染較大。


3、氯氣吸入法

暴露于低濃度的氯會優(yōu)先對大呼吸道造成損害,而對肺泡損害較弱,從而造成廣泛氣道損害。高濃度的氯(800g/m3、5min) 會直接導致呼吸道和肺泡雙重損傷進而導致急性氣道炎癥反應的發(fā)生。由于氧化應激標志物的發(fā)現(xiàn)以及低分子量抗氧化劑對異常情況的緩解,進而證明氯氣對氣道造成的損害本質上是氧化性的。


4、LPS注射法

LPS是蛋白質、類脂質及多糖的復合物,也是重要的致炎因子,可引起氣道上皮損傷,激活炎性細胞并釋放炎性因子,誘導氣道炎癥。

造模方法:選用小鼠或大鼠作為實驗對象,采用氣管滴注等方法制備CB動物模型。

優(yōu)缺點:本方法簡單經(jīng)濟、易定量、耗時短且污染較少。由于LPS注射法具有足夠的刺激強度,同時又考慮到人類CB的發(fā)病機制,故可成功復制出CB的動物模型。其缺點是LPS過量會導致急性肺損傷改變,不利于CB的階段性觀察,故前期造模條件的摸索尤為重要。


5、甲醛刺激法

造模方法:有研究者選用20%的甲醛(10mL)刺激模型組小鼠1h,連續(xù)刺激30d的方法復制CB 模型。自第10天起,該模型中小鼠的氣管及支氣管黏膜出現(xiàn)輕度充血水腫、杯狀細胞輕微增生、炎性細胞浸潤及肺間質輕度充血。隨造模時間延長,小鼠體質量日益減輕,同時炎癥逐漸加重。自20d起,部分上皮鱗狀化生明顯,較大支氣管出現(xiàn)不同程度的炎性細胞浸潤。直至第30d,黏膜充血明顯,中、小支氣管黏膜上皮細胞出現(xiàn)灶性變性壞死、脫落,杯狀細胞大量增生,大量黏液分泌及分泌物增加。

優(yōu)缺點:優(yōu)點是裝置和操作簡單,成本較低,實際應用較為方便。缺點為甲醛易揮發(fā),污染環(huán)境。

總結

由于實驗動物與人類的氣道存在解剖學、炎癥或纖維化上的差異,上述造模方法皆不能完全模擬CB病理特點,需在造模方法、試劑用量以及頻率等方面反復推敲,對比并分析各方法結果的差異,不斷完善CB模型的研究,同時對于其他新型造模方法的建立進行進一步的研究和探索。


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