動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷模型
疼痛是人們一生中經(jīng)常遇到的不愉快感覺(jué)，它提供軀體受到威脅的警報(bào)信號(hào)，是生命不可缺少的一種特殊保護(hù)功能。另一方面它又是各種疾病最常見(jiàn)的癥狀，也是當(dāng)今困擾人類(lèi)健康最嚴(yán)重的問(wèn)題之一。根據(jù)神經(jīng)生理功能，疼痛可分為生理性疼痛和病理性疼痛，神經(jīng)病理性疼痛是由神經(jīng)系統(tǒng)損傷或異常的一種難以治療的疼痛狀態(tài)。坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷模型（chronic constriction injury of the sciatic nerve，CCI）是研究神經(jīng)病理性疼痛最常見(jiàn)的動(dòng)物模型。該模型操作簡(jiǎn)單，易掌握，術(shù)后第2天開(kāi)始便出現(xiàn)疼痛反應(yīng)，10～14天達(dá)到高峰，持續(xù)2個(gè)月后疼痛反應(yīng)消失。
CCI動(dòng)物模型的建立：
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康SD大鼠，6～8周齡，雄性，體重180～250g；
手術(shù)器械準(zhǔn)備：4-0縫線、縫合針、彎鑷2把、眼科剪1把、止血鉗1把、5ml注射器、自制輔助固定鉤2支、酒精棉球、棉簽、電動(dòng)剃毛器等；
操作步驟：
采用7%水合氯醛按0.5ml/100g的劑量腹腔注射麻醉動(dòng)物，電動(dòng)剃毛器剃去左后肢大腿外側(cè)至股骨區(qū)域的毛發(fā)。
將動(dòng)物以俯臥位固定四肢于手術(shù)板上，酒精棉球?qū)κ中g(shù)區(qū)皮膚進(jìn)行消毒處理后切開(kāi)左側(cè)大腿皮膚約1.5cm。
止血鉗順肌紋鈍性分離股二頭肌即可暴露出坐骨神經(jīng)。固定鉤稍微撐開(kāi)肌肉，暴露出手術(shù)視野，用鑷子輕柔分離出坐骨神經(jīng)，在坐骨神經(jīng)三叉分支前的主干部位游離神經(jīng)7mm左右。
在距離三叉分支前2mm處，用4—0縫合線結(jié)扎坐骨神經(jīng)4道，每道間距1mm，使被結(jié)扎的神經(jīng)長(zhǎng)約4～5mm。結(jié)扎的松緊程度以打結(jié)時(shí)可見(jiàn)小腿肌肉或腳趾輕微抽動(dòng)為準(zhǔn)。
手術(shù)區(qū)用生理鹽水或PBS沖洗干凈，依次縫合肌肉、皮下組織及皮膚，清洗傷口并用酒精消毒。
CCI動(dòng)物模型的驗(yàn)證：
行為學(xué)觀察：在術(shù)后兩周內(nèi)，每隔1～2天觀察大鼠的步態(tài)和左后肢的姿勢(shì)、局部皮膚以及肌肉張力的改變程度、是否存在舔咬肢體現(xiàn)象等。較成功的模型術(shù)后1～2周內(nèi)，下肢行走無(wú)力，左側(cè)足趾并攏輕度外翻，經(jīng)常懸空不敢著地；站立時(shí)以右后肢持重，左后肢抬起并緊貼腹部；術(shù)后14d左右，左后肢出現(xiàn)比較明顯的肌肉萎縮。
WB檢測(cè)GCH1表達(dá)程度：分別于手術(shù)3、7、14、28天，取大鼠手術(shù)側(cè)L4～L6背根神經(jīng)節(jié)（DRG），Western Blotting檢測(cè)與疼痛相關(guān)基因三磷酸環(huán)化水解酶1（GCH1）的表達(dá)變化。與正常大鼠相比，CCI大鼠GCH1的表達(dá)水平明顯更高，且呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。