一、原理

DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后，被水解生成DCFH。而DCFH不能透過(guò)細(xì)胞膜。細(xì)胞內(nèi)的ROS可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF。DCF被488nm激發(fā)光激發(fā)后，發(fā)射530nm的熒光信號(hào)，被FITC通道接收，檢測(cè)DCF的熒光就可以判定細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS的水平。

二、實(shí)驗(yàn)流程

收集細(xì)胞→PBS清洗→JC-1工作液孵育→熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀分析

三、注意事項(xiàng)

樣品為帶培養(yǎng)基的活細(xì)胞，常溫運(yùn)輸

四、應(yīng)用

1、ROS可對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、核酸和蛋白分子產(chǎn)生氧化作用，引起其結(jié)構(gòu)和功能障礙。

2、ROS增多會(huì)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)(Oxidative Stress)造成細(xì)胞損傷

3、ROS參與多種病理機(jī)制，百種以上的疾病狀態(tài)都可能有ROS的參與。

4、檢測(cè)細(xì)胞ROS的含量，可以了解ROS在細(xì)胞一些生理和病理狀態(tài)中的變化，分析藥物效應(yīng)和相關(guān)機(jī)制